紫外吸收检测器是高效液相色谱和超高效液相色谱系统中常用的检测器之一,通过测量样品在固定波长下对紫外-可见光的吸收强度,实现对芳香族化合物、共轭体系及部分无机物的高灵敏度定量分析。其性能发挥高度依赖于波长选择、流动相兼容性、光路清洁与基线稳定。若操作不当,易导致基线漂移、噪声增大、灵敏度下降或流通池堵塞。遵循
紫外吸收检测器标准化、精细化的操作流程,才能实现设得准、流得畅、测得稳。

一、使用前准备
流动相要求:
必须使用HPLC级溶剂,水相应经0.22μm滤膜过滤;
避免使用强紫外吸收溶剂作主成分,截止波长需低于检测波长(如甲醇截止≈205nm,乙腈≈190nm);
充分脱气:
流动相必须超声脱气15分钟或在线脱气,防止气泡进入流通池引起基线噪声或信号跳变。
二、参数设置与平衡
波长选择:
优先选用待测物吸收波长(λmax),可通过DAD全波长扫描确定;
多组分分析时,可设固定波长或时间程序切换;
参比波长(如有):
启用参比波长(如400nm)可补偿光源波动,提升基线稳定性;
系统平衡:
更换流动相后,至少冲洗30分钟,直至基线平稳(漂移<0.5mAU/h)。
三、进样与运行监控
避免强溶剂进样:
样品溶剂强度不应高于流动相,否则引起峰形畸变(“溶剂效应”);
实时观察基线:
正常基线应平滑、低噪;若出现毛刺,检查是否有气泡或污染;
压力异常处理:
若背压突升,立即停泵,排查是否流通池堵塞。
四、使用后维护
冲洗流通池:
分析结束后,先用高比例水相冲洗缓冲盐(如10mM磷酸盐),再换有机相(如甲醇/乙腈)保存;
严禁含缓冲盐流动相直接进入高比例有机相,防止盐析结晶堵塞毛细管;
关机前purge光路:
部分机型支持“purge”功能,清除残留气泡。